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构建稳定细胞株是生物制药领域CMC流程中的核心步骤，通过精心策划的实验设计筛选出高效且稳定表达目标蛋白的细胞株，从而为后续的生物制品的产量和质量奠定基础。

在构建稳定细胞株过程中，以下的关键环节需严格遵循以确保高效与稳定：

1.载体策略与设计：在载体设计阶段，需精心选择启动子、增强子等调控元件，以精确控制目的基因的表达水平。

2. 转染方法与优化：根据目标细胞类型及实验需求，选择合适的转染方法，如电转、脂质体介导、病毒介导等。

3.高通量筛选与克隆鉴定：利用高通量筛选技术和先进的检测方法，如单细胞打印机，对转染后的细胞进行快速筛选，挑选出表达水平高且稳定的细胞克隆。

4.表达稳定性监测：在细胞株构建完成后，需定期检测目标基因的表达情况，包括表达水平、时空分布等。通过长期跟踪监测，确保细胞株的遗传稳定性和表达稳定性，以满足后续实验与应用的需求。

单克隆筛选是细胞系开发中的关键步骤，旨在从混合细胞群体中分离出单个细胞，并使其增殖形成遗传背景均一的细胞克隆。以下是一些常见的单克隆筛选方法：有限稀释法，半固体培养基挑选法，以及流式细胞术挑选法等。

有限稀释法和流式荧光激活细胞分选（FACS）很常见，但在效率、选择控制和细胞活力等方面都不理想。有限稀释法虽然经济，可能比FACS分选对细胞造成损伤小，但耗时耗力，可能还会有些人为因素的影响。

流式分选虽然对单细胞有良好控制且通量高，但分选时产生的高剪切力和持续静电，会对敏感或部分受损细胞（如电转）的存活率/克隆效率有很大不良影响。

单细胞打印技术它以一种非常温和、低成本和高度可控技术，适合从0-40μm的各种特异性细胞克隆应用。通过专利的喷墨式打印技术将单个细胞非接触式的分离到标准的96/384孔板中，实现高通量工作流程。特别适用于工程细胞的克隆，在维持细胞原有生命活力的同时，还为单细胞克隆性提供了直接的证据（提供每个打印细胞的可靠记录），可根据细胞直径、圆度和荧光强度进行分选，并且可以整合到其它单细胞分析管路上，与各种下游流程的兼容性。

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