HTRF Human and Mouse Total ERK Detection Kit-Revvity-瑞孚迪
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64NRKPEH HTRF Human and Mouse Total ERK Detection Kit 10K PTS

 

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该试剂盒可用于检测人类和小鼠细胞中的总细胞外信号调节激酶(ERK)。HTRF(均相时间分辨荧光)技术通常具有高灵敏度、特异性和稳定性,可以在无需洗涤步骤的均相检测体系中准确测量目标分子的含量。这种试剂盒可在生物学研究、药物研发等领域中发挥重要作用,帮助研究人员了解细胞信号转导通路中 ERK 的活性变化。

产品特点

 

 

工作原理:

总 ERK 检测原理:
总 ERK 检测用于量化细胞裂解物中 ERK 的表达水平。与蛋白质印迹法不同,该检测完全基于微孔板,不需要凝胶、电泳或转膜。总 ERK 检测使用两种标记抗体:一种与供体荧光团偶联,另一种与受体偶联。这两种抗体对蛋白质上不同的表位具有高度特异性。在细胞提取物中存在 ERK 的情况下,加入这些偶联物会使供体荧光团与受体紧密接近,从而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。其强度与样品中存在的蛋白质浓度直接成正比,并在无需洗涤的检测形式下提供了一种评估蛋白质表达的方法。

 

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总 ERK 双板检测方案:
双板方案涉及在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解,接着将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中,之后加入总 ERK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和融合度。

 

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总 ERK 单板检测方案:
使用 HTRF 试剂检测总 ERK 可以在一个用于培养、刺激和裂解的单板上进行。无需洗涤步骤。这个为高通量筛选设计的方案能够实现微型化,同时保持强大的 HTRF 质量。

 

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检测验证:
在各种细胞系上对总 ERK1/2 检测的验证:
人类(Hela、A431、HEK293、Jurkat)、小鼠(NIH 3T3)和仓鼠(CHO-K1)细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% 二氧化碳的条件下培养 2 天。移除细胞培养基后,加入 3 毫升补充裂解缓冲液 3 并孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用 16 微升细胞裂解物检测 ERK1/2。其他物种的细胞系尚未经过测试,因此必须根据具体情况进行评估。

 

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总 ERK 检测用于控制 ERK1/2 的磷酸化:
使用磷酸化 ERK1/2 和总 ERK1/2 检测的双板检测方案,A431 细胞(每孔 100,000 个细胞)用 EGF 激活 10 分钟。正如预期的那样,获得的结果显示在 EGF 刺激下 ERK1/2 磷酸化呈剂量反应性增加,而 ERK1/2 的表达水平保持恒定。

 

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简化的通路:
MAPK/ERK 细胞信号通路。

 

MAPK/ERK 信号级联由参与生长和分化的多种受体激活。核心信号转导级联引发对众多细胞过程的调节,包括黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位点催化 ERK1/2 的磷酸化。作为响应,ERK 磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号的广泛复杂性和多样性使 ERK 成为生物学中的关键调节因子和主要信号节点。

 

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ERK 在 G 蛋白偶联受体(GPCR)信号通路中的作用:
ERK 的调节在 GPCR 信号通路中起着重要作用,因此是一个重要的可测量的 GPCR指标。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用,调节广泛的细胞功能。在受到刺激时,这些受体激活效应物如腺苷酸环化酶和磷脂酶 C,这不仅影响细胞内第二信使如 cAMP 和 Ca²⁺的浓度,还介导 ERK1/2 的磷酸化。GPCR 也已被证明以不依赖 G 蛋白但依赖 β-arrestin 的方式介导 ERK1/2 的激活。

瑞孚迪(Revvity)是瑞孚迪生物医学(上海)有限公司旗下品牌,将“不可能”视为灵感,将“做不到”视为原动力。瑞孚迪提供健康科学解决方案、前沿技术和专业服务,业务涵盖科研探索、开发、诊断、治疗的端到端全流程。依托在转化多组学技术、生物标志物鉴定、成像、疾病的预测、筛查、检测与诊断、信息学等领域的多年深耕,瑞孚迪正以科技之能,突破人类潜能的边界。

 

2023年瑞孚迪的营业额超过27亿美元,全球拥有11,000多名员工,为制药和生物技术企业、诊断实验室、科研机构和政府机构等客户提供多样化服务。公司是标准普尔500指数的成员,客户遍及全球190多个国家和地区。

Q:HTRF和AlphaLISA适合如何选择?

A:HTRF和Alpha两种方法各有优势,首先确认酶标仪是否具有相应的模块,如果都具备,从实验便利性和数据呈现来看,HTRF操作更方便,但是Alpha数据表现、样本适应性上优势明显,客户根据自己需求进行选择。

 

Q:为什么样本稀释倍数越低,试剂盒测出的待检物质的含量反而越低?

A:按照经验来看,应该是出现hook效应了,一般用夹心法检测的话,如果样品的浓度远超过标曲的线性范围,就会出现测量结果降低的情况,需要对样品做进一步的稀释。

 

Q:搭配HTRF浅孔板货号?

A:96孔浅孔板:66PL96001(1个板子),66PL96005(5个板子),66PL96025(25个板子),66PL96100(100个板子)
384孔板:6008280(50个板子),6008289(200个板子)。

 

Q:如何查产品效期?

A:首先看说明书,如果说明书没有明确的保质期,则用产品货号在revvity官网查到该产品的页面,页面最下方有该产品的data sheet,data sheet里面有具体的保质期限。

 

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