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玮驰小课堂丨Lonza 4D-Nucleofector X 模块电转条件优化指南

时间:2022-06-15 来源:上海玮驰仪器有限公司 阅读:164

 

本期我们将为您提供优化 4D-Nucleofector™ X 单元的 Nucleofection™ 条件的指南,及有关该主题的常见问题。

 

Nucleofector™ I 或 II 条件与4D-Nucleofector™ X 单元兼容度

4D-Nucleofector™ 系统基于升级后的 Nucleofector™ 技术,主要改进如下:

  • 两种 Nucleofection™ 体系(20ul和100ul),且实验条件可以互相转移
  • Nucleocuvette™ 由导电聚合物而非铝组成,提高了细胞活力
  • 简化的 4D-Nucleofector™ 试剂
  • 更广泛的程序来微调您的优化

 

由于这些差异,为 Nucleofector™ I 或 II 设备推荐的解决方案对 4D-Nucleofector™ 系统无效。然而,在 4D-Nucleofector™ X 单元上运行优化是一个潜在改善 Nucleofection™ 结果的机会。

 

可以优化哪些参数

在 Nucleofection™ 优化中,最重要的参数是 Nucleofector™ 试剂和程序。

 

使用什么底物进行优化

无论您感兴趣的底物(质粒、siRNA、蛋白质或化合物)如何,我们始终建议使用我们的 pmaxGFP™ 载体进行优化。使用 pmaxGFP™ Vector 进行优化消除了许多变量,例如底物制备的性质和质量以及分析时间。

 

以什么 Nucleofection™ 体系优化

4D-Nucleofector™ X 单元旨在简化优化步骤。我们建议使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 进行优化,减少珍贵细胞的消耗。确定最佳条件后,您可以使用相同的方案,通过将细胞数量和底物数量乘以 5 来简单地切换到 100 μl Nucleocuvette™。

 

如何优化 4D-Nucleofector™ X 单元的 Nucleofection™ 条件

首先访问Lonza 开放的数据库,http://knowledge.lonza.com查找相关程序及方案。

 

当您的细胞没有推荐的方案时,将适用以下三种情况之一:

  • 如果没有任何可用的建议,则开始第一轮优化。几种 Nucleofector™ 试剂(原代细胞的 P1 至 P5 和细胞系的 SE、SF 和 SG)中的每一种都将使用 15 个不同的程序进行测试。
  • 遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 单元方案(如果有)。使用少量的程序 (6–7个) 测试一个或两个 Nucleofector™ 试剂。
  • 数据库描述了 4D-Nucleofector™ X 单元的 Nucleofection™ 条件和数据。您可以选择测试它们或返回前两个选项之一。

 

如何进一步改善Nucleofection™ 条件

参考下方的优化策略,可能会改善 Nucleofection™ 结果:

  • 在表格中选择效果好的初始程序(例如 DN-100)。表格中间垂直列出的是第一轮优化中描述的 15 个程序。
  • 使用所选程序左侧的程序来提高细胞活力(例如 DH-100)。使用右侧的程序来提高转染效率(例如 ER-100)

 

产品快速通道:4D Nucleofector 核转系统-X-Lonza-龙沙

https://www.weichilab.com/product/Nucleofector-X.html

 

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