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提高电转染效率的小技巧

时间:2021-11-18 来源:上海玮驰仪器有限公司 阅读:401

01

Nucleofection™核转的处理 – 

简单的操作方案

 

步骤一:

 

获取目标细胞

 

步骤二:

混合和结合

 

转移至Lonza认证的电转杯或电转板条中

 

步骤三:

选择Nucleofector™程序,放入电转耗材,按下开始按钮

 

步骤四:

用培养基将电转耗材的细胞转移出来

 

步骤五:

转移至培养皿中。Nucleofection™电转后3-8小时即可检验

 

 

 

02

提高Nucleofection™核转效率

 

小技巧:

1.准备好加了新鲜培养基的多孔板,并在实验前于37°C下预平衡。

2.使用传代次数少并具有推荐融合度或密度(对数生长)的细胞。

3.限制胰蛋白酶暴露时间,仔细监测细胞分离情况。

4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数;所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加。

5.采用高质量DNA,使用内毒素去除试剂盒进行纯化;请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度。

6.室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心。

7.离心后加入Nucleofector™溶液,混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液,避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头抽吸。

8.Nucleofection™核转后,用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基。

 

轻轻将一次性移液管吸头置于电转耗材底部,收集细胞

 

•将细胞悬液轻轻接种至制备的多孔板中

 

•请勿重复抽吸混合细胞