高灵敏•免洗•高通量：瑞孚迪均相技术实现表观遗传学从生化到细胞水平全流程检测

表观遗传学检测技术挑战

表观遗传修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等多种形式。这些修饰的研究面临诸多技术挑战：需要高灵敏度以检测低丰度修饰，高特异性以区分相似修饰状态，以及能够在接近生理状态的条件下进行研究的能力。

均相检测技术工作原理/优势

传统方法如质谱、凝胶迁移实验（EMSA）和染色质免疫沉淀（ChIP）等往往操作繁琐、通量低或需要破坏性样品处理。

瑞孚迪（Revvity）技术作为均相检测平台，克服了这些限制，为表观遗传学研究提供了新的解决方案。无需洗涤步骤，适用于高通量筛选，并能在接近生理条件下进行研究。

01、HTRF（均相时间分辨荧光技术）

基于荧光共振能量转移（FRET），由供体（铕/铽穴状化合物）和受体（d2/XL665）组成。当两者距离<10nm时，供体能量转移至受体，产生特征发射光。结合时间分辨荧光（TRF）技术，消除背景干扰，提高信噪比。

02、Alpha（放大发光邻近均相检测技术）

基于单线态氧能量转移，由供体珠（包被光敏剂）和受体珠（含化学发光剂）组成。当生物分子相互作用使微珠接近时，激光激发产生单线态氧，触发化学发光。由于氧扩散距离短（~200nm），背景极低，适合大分子复合物检测。

均相检测技术具有以下几点优势：

Ø 高灵敏度：可检测低丰度表观遗传修饰

Ø 高特异性：能区分细微的修饰状态差异

Ø 均相检测：无需洗涤步骤，操作简便

Ø 高通量：适合384甚至1536孔板，实现快速筛选

Ø 宽动态范围：可高达6个数量级

生化水平表观遗传学检测

1. 表观甲基转移酶检测是一种通用的生化检测，用于检测组蛋白（HMTs）和DNA （DNMTs）甲基转移酶家族在酶反应过程中产生的s -腺苷型同型半胱氨酸（SAH）-水平以反应酶活变化。

HTRF甲基转移酶试剂盒检测原理

2. 组蛋白修饰分析是均相检测试剂的另一重要应用。瑞孚迪提供了一系列工具箱试剂，通过设计针对特定修饰位点的抗体（如H3K27me3、H3K9ac等），能够准确检测组蛋白H3甲基转移酶（HMT）、去甲基化酶（HDM）和去乙酰化酶（HDAC）等多种修饰酶的活性，并有效区分单甲基化、双甲基化和三甲基化等不同修饰状态。采用生物素化的组蛋白肽底物，结合链霉亲和素供体系统，与甲基特异性肽（如未甲基化、单甲基化、二甲基化或三甲基化肽）的浓度成正比，实现高灵敏度定量。

已验证数据

HTRF表观遗传学生化水平检测原理图

细胞水平表观遗传学检测

瑞孚迪的 EPIgeneous 细胞水平表观修饰测定试剂盒采用均相检测技术，无需分离纯化，只需裂解细胞即可直接测量贴壁或悬浮细胞内的组蛋白甲基化、乙酰化及总蛋白水平，提高检测效率。相比Western blot，均相检测技术能节省75%时间，更适合高通量筛选，加速了表观遗传靶向药物的开发进程。(一键直达TrypLUS消化液开瓶即传代：消化液的“常温”革命！）

Alpha表观遗传学细胞水平检测原理图

均相检测技术作为表观遗传学研究的重要工具，从生化水平到细胞水平提供了全面解决方案。其高灵敏度、高特异性和高通量特点，使其在机制研究、药物发现和临床应用中展现出独特价值。随着技术的不断创新和优化，均相检测技术必将继续推动表观遗传学领域的发展，为理解生命本质和开发新型疗法做出重要贡献。

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