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在药物研发阶段,高灵敏度、样本兼容性强的检测技术至关重要。瑞孚迪(Revvity)的DELFIA(Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent Immunoassay)技术作为时间分辨荧光检测(TRF)的代表平台,凭借其超低检测限、宽动态范围和卓越的抗干扰能力,已成为免疫检测领域被广泛采用的技术方案之一。
DELFIA vs. ELISA为何更胜一筹
DELFIA技术原理与优势
DELFIA(解离增强镧系荧光免疫检测)是一种检测方法,其操作步骤与ELISA类似,区别在于DELFIA采用镧系元素(如铕Eu、铽Tb、钐Sm等)标记的二抗,而ELISA通常使用HRP(辣根过氧化物酶)偶联的二抗,两者的发光原理存在显著差异,这使得DELFIA方法在线性范围和灵敏度方面表现更优,能够满足更高标准的检测需求。
DELFIA的优势
在加入Enhancement Solution(增强液)之前,加样板可长期保存,无需立即检测,为实验安排提供了更大的便利性。
DELFIA技术可实现多指标同时检测,Eu(615nm)、Sm(643nm)、Tb(545nm)光谱无重叠
该方法对复杂基质样本(如血清、组织等)具有良好兼容性,能够有效降低背景干扰,确保检测结果的准确性。
DELFIA技术应用领域
01免疫检测
DELFIA免疫检测支持方法:直接法、间接法、竞争法,可无缝转换传统ELISA至DELFIA平台。
1.1 靶点结合与活性筛选
受体-配体相互作用:如GPCR与配体结合亲和力。
蛋白-蛋白结合:抗体-抗原表位结合分析(如PD-1/PD-L1阻断剂筛选)。
1.2细胞信号通路研究
磷酸化/总蛋白动态监测:如p-ERK/ERK比值(评估MEK抑制剂效果),STAT5磷酸化(JAK-STAT通路激活分析)。
1.3生物标志物分析
疾病相关标志物定量检测:如肿瘤标志物(Ki-67)检测;
炎症因子在多组学样本(血清、组织)中的定量:如IL-6、TNF-α等。
Human IL-2的原理和验证数据
02抗体依赖性细胞毒性(ADCC)评价
NK细胞介导的肿瘤细胞杀伤效应检测:靶细胞预标记TDA,被效应细胞裂解的靶细胞将TDA释放到体系中,并与Eu3+形成Eu-TDA复合物,最终通过检测Eu-TDA 的时间分辨荧光信号,来评价抗体药物介导的ADCC效应。
EuTDA的原理和验证数据
03
药物代谢及抗药物抗体检测
药代动力学(PK)研究:抗体类药物(如贝伐珠单抗)在血清中的浓度;
生物药免疫原性分析:检测动物血液中阿达木单抗(抗TNF-α)、英夫利昔单抗的抗体(ADA)产生情况。
ADA的原理和验证数据
04细胞增殖检测
细胞增殖分析:由于细胞增殖过程需要细胞DNA的复制,基于检测DNA合成的方法可以作为细胞增殖的精准指标,BrdU作为一种嘧啶类似物,可以代替胸苷结合到新合成的DNA中,通过检测荧光强度判读细胞增值情况。
BrdU的原理和验证数据
结论
DELFIA技术凭借其超高灵敏度、卓越的抗干扰能力和灵活的多重检测,持续推动药物研发的进程。无论是基础研究、还是药物研开发阶段,DELFIA均为科学家提供了值得信赖的工具。
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