有问有答｜为您答疑解惑Lonza电转系列二

Q：可以单独订购Nucleofector®试剂盒中的组分吗？

A：Nucleofector®试剂盒仅作为完整的试剂盒提供，不单独提供试剂盒中的任何组分。

Q：试剂盒中的Solution冷冻了，会有影响吗？

A：只要Solution中没有添加Supplement组分，就没有影响，即使是几个月的长期储存也不会改变Solution的性能。但是，如果添加Supplement后进行了冷冻，检查是否有沉淀物，如果存在沉淀物，需要进行测试，以排查是否影响性能。

Q：Nucleofector®试剂盒中包含的pmaxGFP对照载体适合稳定表达吗？

您的pmaxGFP对照载体是否与Nucleofector®试剂盒一起提供，适合稳定表达？

A：不适合。该载体仅作为阳性对照使用，不能用于筛选，因为它不包含哺乳动物选择标记。该载体表达的唯一抗性基因是卡那霉素，只适合细菌筛选。

Q：有哪些方面可以优化，提升DNA转染T细胞后的活率？

A：尽量将DNA量保持在较低水平（例如，每100 µL反应1µg质粒DNA），因为较高的DNA量可能会导致毒性，增加死亡率；使用高纯度的DNA也很重要，例如使用Endofree™ 质粒试剂盒（Qiagen）；另外A260:A280的比例应至少为1.8。

Q：在电转实验中，瞬时基因表达的最佳孵育时间是多少？

A：最佳孵育时间为2-6天。这取决于各种因素，如蛋白质在培养基中的稳定性，蛋白质的潜在毒性、细胞密度和质粒在细胞核中的稳定性。

可以在转染后24、48、72和96小时取出等份样品进行摸索，测定蛋白质表达。

Q：小鼠的年龄对小鼠T细胞转染重要吗？

A：我们建议使用6-12周的小鼠。从太年轻或太老的小鼠中分离的T细胞进行核电转都可能会导致转染效率和活率偏低。