应用案例｜解锁MOGAD患者自身抗体，助力自身免疫疾病研究

来源：布鲁克细胞分析

作者：Jason Xu

导语

在自身免疫性疾病研究领域，如何精准捕捉罕见的自身反应性B细胞并解析其分泌的抗体特征，一直是科学家面临的重大挑战。近期，耶鲁大学医学院与布鲁克细胞分析团队合作，借助 Beacon® 单细胞光导平台，在髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病（Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) antibody-associated disease, MOGAD）的研究中取得突破性进展，为自身抗体发现开辟了高效、精准的新路径。

MOGAD近年被确定为一种独立的自身免疫性中枢神经脱髓鞘病，其核心特征是机体产生针对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（Myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG）的自身抗体。这些抗体被视为 MOGAD 的临床标志物，但它们如何介导中枢神经系统病变的分子机制至今仍不明确。

研究这类疾病的关键在于获取患者来源的单克隆抗体，然而传统抗体发现方法在此面临两大难题：

靶标特殊性：MOG 是一种跨膜蛋白，其生物活性依赖于完整的构象。传统方法难以实现抗体与天然构象 hMOG的特异性结合检测。

细胞稀缺性：分泌 MOG 特异性 IgG 抗体的记忆 B 细胞在患者外周血单个核细胞（PBMCs）中占比极低，如同 “大海捞针”，常规筛选手段效率低下。

来自耶鲁大学医学院的研究团队选择 Beacon®单细胞光导平台作为筛选平台，正是看中其在单B细胞筛选的独特优势。该平台通过光导技术实现单个 B 细胞的精准捕获与培养，结合细胞水平的功能检测，构建了一套高通量自身抗体发现流程。

图1：Beacon®平台筛选MOGAD自身抗体的实验流程。

研究人员从MOGAD患者的PBMC中分离记忆B 细胞，然后利用布鲁克公司专门的人记忆B细胞激活培养基将记忆B细胞激活成抗体分泌细胞，接着用Beacon®平台筛选了61,960个激活的记忆B细胞，从中识别出19,000个分泌IgG的B细胞。通过细胞结合试验，最终发现18对独特的MOG结合抗体序列。经过验证，12个候选序列中成功获得1株具有高特异性的单克隆抗体（来自Pen2497，命名为mAb2497），其重链CDR3序列在筛选中重复出现4次，提示该序列在MOG识别中的重要性。

在独立重复实验中，mAb2497 表现出浓度依赖性的 hMOG 结合活性。即便在低至 0.1 ng/mL 的浓度下，仍能稳定结合靶标，显示出极高的亲和力。

图2：基于Beacon®平台开展细胞结合实验识别抗MOG自身抗体。

图3：来自Pen 2497的单抗被验证能够结合MOG。

图4：关于mAb2497的更多信息和验证结果。A. 对 mAb2497 进行了独立的重新表达，以确认其在活的人源 MOG 细胞结合试验中的结合能力。B. mAb2497在CRO公司生产，并在该公司进行了活的人源 MOG 细胞结合试验，以检测其浓度特异性结合能力。mAb2497 在低至 0.1 ng/mL 的浓度下仍能检测到结合信号。