Pannarase耐高盐核酸酶
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Pannarase耐高盐全能核酸酶是一种非特异性核酸内切酶,该酶产品是从大肠杆菌菌株BL21中表达纯化得到。该蛋白酶是由149个氨基酸构成的单链多肽,分子量为16.8 kDa,Ca2+和Mg2+可以稳定其构象。该酶可以将任何形式的DNA和RNA(线性、环形、超螺旋)降解成3’-单核苷酸及二核苷酸,并可在一系列宽泛的操作条件下保持高效性。本产品可用于盐浓度较高、偏碱性的病毒下游纯化。

产品特点

产品性质:

项目

描述

规格

10万/50万/500万 U/管

分子量

16kDa

纯度

≥99%  (SEC-HPLC)

比活性

≥2x106 U/mg

最适pH

8.5-10

最适温度

37°C

辅助因子

0.55-5 mM Mg2+;0.5-10 mM Ca2+

储存温度

-20°C,避免反复冻融

(由于甘油的存在,-20°C条件下不会冻住)

活力单位:通过测定其裂解鲱鱼精DNA底物的能力(herring Sperm DNA, Sigma,目录号D7290)一个单位Pannarase全能核酸酶活力定义为在37°C pH8.0反应条件下30分钟内导致A260值降低1.0(相当于完全消化37μg DNA)。

 

产品特点:

  • 杰出单位比酶活
  • 非His标签纯化
  • 质谱均一性认证
  • 无动物源(AOF)
  • 耐盐、耐碱性条件

 

SDS-PAGE鉴定

非还原及还原的SDS-PAGE显示蛋白分子量约16kDa,未见杂蛋白。

 

SEC-HPLC纯度测定

 

尺寸排阻色谱显示高纯度,无聚集体产生。

 

应用案例:

1. Na+离子对Pannarase酶活性的影响

Pannarase在中等Na+浓度条件下活性较高,300 mM时仍有36.2%的活性,但浓度超过600mM时酶活性基本完全丧失。

 

2. Mg2+离子对Pannarase酶活的影响

1 mM Mg2+可以提升Pannarase内切酶40%左右的活性,但Mg2+并不是必须的

 

3. Ca2+离子对Pannarase酶活的影响

1 mM Ca2+可以提升Pannarase内切酶28%的活性,但Ca2+并不是必须的

 

4. 不同pH条件下Pannarase酶活性比较

Pannarase酶活性最适pH为pH8.0 - 11.0

 

运输和保存方法:干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。

 

推荐使用条件:

条件

最适条件*

有效条件#

Mg2+

0.55-5 mM

0-10 mM

Ca2+

0.5-10 mM

0-10 mM

pH

8.5-10

7.0-11.0

Na+

0-150 mM

0- 500 mM

*“最适条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>90%的活性

**“有效条件”指的是在此条件下Pannarase核酸酶可保持>15%的活性

注:具体参数可参见Pannarase 产品性能部分

 

使用方法:

1.对于大肠杆菌破碎液

为了达到降低粘度的目的,加入核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定,如果菌体浓度在50%,建议加入的核酸酶的量为1:1000-5:1000,即50万-250万U/L。如果菌体浓度在5%,则可以按照1:10000-5:10000的比例加入。

2.对于细胞裂解液

可以按照106-107个细胞加入500单位核酸酶。

3.对于纯化后的腺病毒或者病毒疫苗

由于DNA含量相对较少,可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。

 

注意事项:

1.酶的最佳作用条件为pH 8.0–11.0,37°C,30min。

2.酶活性比较稳定,室温放置短期内不会有太大影响,长时间保存需放置在-20°C冰箱内。酶用不含甘油缓冲液稀释后尽快使用,不推荐冻存后再使用。

3.对于仅为降低粘度为目的,可以直接加入核酸酶,室温缓慢搅拌30 min。

订货信息

产品货号

产品名称

产品规格

CYG006F0010

Pannarase耐高盐核酸酶

100,000 U

CYG006F0050

Pannarase耐高盐核酸酶

500,000 U

CYG006F0500

Pannarase耐高盐核酸酶

5,000,000 U

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